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细胞膜染色试剂DiR是深红色荧光标记的细胞膜探针，具有748/780nm的最大激发/发射波长。
DiR通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞，具有良好的染料维持性，有着强而稳定的深红色荧光（Ex/Em=748/780nm），与绿色荧光染料具有良好的荧光分辨性，适合做多重指标染色。工作浓度下，此染料无细胞毒性，不会影响细胞活力以及增殖能力。
DiR具强效的近红外光穿透细胞或组织，并在近红外区具较低的自荧光水平，这些特性使其特适用于体内成像或示踪实验。
以96孔板每孔200μL染色液计，本试剂盒可以染色1000～5000个样本。
检测方法：
● 流式细胞仪● 荧光显微镜● 激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞● 贴壁细胞

组份	1000-5000T
组份A：细胞膜DiR染料	500μL

染料-20℃避光保存；避免反复冻融；有效期6个月。
注：
● 染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
● 试剂拆封后请尽快使用完！


流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦，离心机，移液器，PBS缓冲液或HBSS（无酚红）


● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。
● 以下方法仅供参考，根据需要使用，或者参考文献的使用方法。
● 染色后立即进行分析。
● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。


1、染色工作液的配制：根据样本数量，用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针DiR进行500～2500倍稀释，配制成染色工作液。
【注】:
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度500～2500倍稀释，1000～2000倍适合大多数细胞样本。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。
2、细胞染色
悬浮细胞染色
1)用PBS洗涤细胞2次。
注：
● 500×g离心5分钟。
2)加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×106/mL。
3)在37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
注：
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)孵育结束，500×g离心5分钟。
5)倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的培养基重悬细胞。
6)重复（4），（5）步骤两次以上
贴壁细胞染色
1)用PBS洗涤细胞2次。
2)细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
注：
● 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。
3)37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
注：
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)吸干染色工作液，用培养液洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10分钟，然后吸干培养基。
3、用荧光显微镜或流式细胞仪检测
激发波长为748nm，最大发射波长为780nm。
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